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更新時(shí)間：2023-11-13
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轉(zhuǎn)染是將外源性核酸（DNA或RNA）采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入細(xì)胞，從而實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞基因功能的蛋白質(zhì)表達(dá)研究。生成重組蛋白，或特異性地增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)是轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的主要目的。因此，轉(zhuǎn)染是一種功能強(qiáng)大的分析工具，可用于基因或基因產(chǎn)物的功能和調(diào)控研究，用于生成轉(zhuǎn)基因生物，并可用作基因治療方法。常規(guī)的轉(zhuǎn)染技術(shù)主要分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，怎么選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢？
選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，具體取決于您要開展的實(shí)驗(yàn)的時(shí)間范圍和最終目標(biāo)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞一般在轉(zhuǎn)染后24-96小時(shí)收集，常用于研究基因或基因產(chǎn)物的短期表達(dá)效應(yīng)，執(zhí)行RNA干擾（RNAi）介導(dǎo)的基因沉默，或快速生成小量重組蛋白。相比之下，當(dāng)需要長期基因表達(dá)或轉(zhuǎn)染細(xì)胞需在多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中使用時(shí)，則更多地選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。由于將DNA載體整合至染色體中的概率較低，細(xì)胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染更麻煩、更具挑戰(zhàn)性，需要選擇性篩選和克隆分離。因此，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通常用于大規(guī)模的蛋白質(zhì)生產(chǎn)、長期藥理學(xué)研究、基因治療或長期基因調(diào)控機(jī)制研究。
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 |
外源基因保留在細(xì)胞核內(nèi)，不整合到基因組中 | 外源基因整合到基因組中 |
外源基因不傳給子代，遺傳改變是暫時(shí)的 | 外源基因代代相傳，遺傳改變是長久的 |
瞬轉(zhuǎn)的質(zhì)粒不需要帶有抗性 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)質(zhì)粒一定要帶有特定的抗性以便選擇性篩選出穩(wěn)轉(zhuǎn)克隆株 |
DNA、RNA都可用于瞬轉(zhuǎn) | 只有 DNA可用于穩(wěn)轉(zhuǎn)，RNA 本身不能穩(wěn)定導(dǎo)入細(xì)胞 |
操作簡單，構(gòu)好質(zhì)粒經(jīng)細(xì)胞復(fù)蘇、轉(zhuǎn)染、細(xì)胞培養(yǎng)、蛋白純化等步驟即可得到目的蛋白 | 需先將構(gòu)好的質(zhì)粒線性化，再導(dǎo)入細(xì)胞，經(jīng)過篩選、細(xì)胞傳代等步驟才能得到穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系 |
周期短，快速產(chǎn)生高表達(dá)目的蛋白 | 周期長，需要 2~3 周篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株，蛋白表達(dá)水平低 |
無法長期生產(chǎn)得到重組蛋白 | 能夠長期穩(wěn)定生產(chǎn)目的蛋白 |
實(shí)驗(yàn)成本低 | 實(shí)驗(yàn)成本高，得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株后再生產(chǎn)蛋白成本大大降低 |
本期內(nèi)容：怎么選擇瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染呢？
下期內(nèi)容：ELISA實(shí)驗(yàn)的具體步驟
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