美國AAT Bioquest公司

前身是ABD Bioquest，Inc. 簡稱AATbio，是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學(xué)家提供研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。

AAT Bioquest產(chǎn)品系列

1、用于標(biāo)記小藥物分子和生物聚合物（如蛋白質(zhì)，核酸和碳水化合物）的反應(yīng)熒光和發(fā)光探針，生物素和標(biāo)簽酶

2、用于檢測蛋白質(zhì)，核酸和活細(xì)胞的熒光和發(fā)光探針

3、用于檢測多種酶的熒光和發(fā)光探針，特別是水解和氧化還原酶

4、開發(fā)用于信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的試劑

5、生理和神經(jīng)學(xué)探針，如鈣指示劑和膜電位探針

AAT Bioquest產(chǎn)品列表

關(guān)于熒光染料：   

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其最佳濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。

熒光顏色

DiI（橙色 ）   DiO（綠色）

DiD（紅色 ）  DiR（深紅）

這些顏色為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用，其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常優(yōu)質(zhì)的替代品。

使用方法：

1. DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細(xì)胞膜染色液制備

  (1) 配置DMSO或EtOH 儲存液：

      儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。

      注意：未使用的儲存液保存在-20℃，避免反復(fù)凍融

  (2) 工作液制備：

      用合適的緩沖液(如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)

      稀釋儲存液，配制濃度為1～5 µM的工作液。

     注意：工作液的最終濃度是根據(jù)不同細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件。

2. 懸浮細(xì)胞染色

  (1) 懸浮細(xì)胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中。

  (2) 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，

       不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。

  (3) 1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。

  (4) 傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37的培養(yǎng)液。

  (5) 重復(fù)(3)，(4)步驟兩次以上。

3. 粘壁細(xì)胞的染色

  (1)使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

  (2)從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。

  (3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。

  (4)在37 培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。

  (5)吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4. 流式細(xì)胞儀的檢測

  DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。

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