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Gibco分散酶Dispase II,粉末是一種氨基內(nèi)肽酶,可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用,可用于原代細(xì)胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶 II 相對溫和,在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力,通??删S持細(xì)胞膜完整性。
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RELATED ARTICLES【產(chǎn)品名稱】Gibco分散酶Dispase II,粉末
【產(chǎn)品貨號】17105041
【產(chǎn)品規(guī)格】5 g
【產(chǎn)品狀態(tài)】凍干
【產(chǎn)品類型】細(xì)胞培養(yǎng)解離試劑
【產(chǎn)品效期】24個月
【產(chǎn)品運(yùn)輸】室溫
【產(chǎn)品簡介】Gibco分散酶Dispase II,粉末是一種氨基內(nèi)肽酶,可水解非極性氨基酸殘基的 N 端肽鍵。該序列常見于膠原蛋白。分散酶 II 具有溫和的蛋白水解作用,可用于原代細(xì)胞的分離和常規(guī)傳代。分散酶 II 相對溫和,在生理溫度和 pH 值條件下具有良好的解離能力,通??删S持細(xì)胞膜完整性。Gibco™ 分散酶 II 在多粘芽孢桿菌中生產(chǎn),包裝形式為凍干非無菌粉末,供細(xì)胞或組織解離等研究使用,并防止在懸浮培養(yǎng)中結(jié)團(tuán)。我們保證 Gibco™ 分散酶 II 的活性大于 0.5 單位/mg。
【產(chǎn)品使用】
重建Dispase
1. 將非無菌酶溶解在Dulbecco 's磷酸緩沖鹽水(DPBS)中,不含鈣和鎂至10 mg/mL。
2. 再用不含鈣和鎂的DPBS稀釋至終濃度0.6-2.4 U/mL。
注意:濃度不建議高于2.4 U/mL。
3.通過0.22µm的過濾膜過濾滅菌。
分離組織
1.用無菌剪刀將組織切成3-4毫米的小塊。
2.在不含鈣和鎂的無菌DPBS中清洗幾次組織片。
3.將組織片段浸入Dispase溶液(0.6-2.4 U/mL)中,37℃孵育。
4.在37°C下緩慢攪拌,直到組織充分溶解。對于致密組織,我們建議孵育1小時。即使經(jīng)過幾個小時的消毒,細(xì)胞也不會受到不良影響。
5.如有必要,通過無菌不銹鋼或尼龍網(wǎng)將分散的細(xì)胞從殘留組織中分離出來,或者在較大的碎片沉淀后簡單地倒入細(xì)胞。如果需要進(jìn)一步分解,可以向剩余的組織碎片添加新鮮的Dispase溶液。
6.離心使細(xì)胞成球,倒入酶溶液。
7.將細(xì)胞顆粒重新懸浮在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中。使用伯爵夫人®自動細(xì)胞計數(shù)器確定活細(xì)胞密度(可使用自動或手動替代方法)。
8.將細(xì)胞植入含有適當(dāng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中,在預(yù)定條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
注:通過將濃度為0.3-0.6 U/mL的disase與膠原酶(60-100 U/mL)混合,可以更有效地分離組織。