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產(chǎn)品簡介
1.1×S4 Fidelity PCR Mix（dye-）為1.1×即用型快速PCR預(yù)混液，內(nèi)含S4 Fidelity DNA polymerase、dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系，只需添加引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，可有效擴(kuò)增5 kb以內(nèi)的DNA片段。該酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，可直接用于平末端克隆。
相關(guān)文章
產(chǎn)品特點(diǎn)
? 操作簡單：1.1×即用型預(yù)混液，無需添加ddH2O，大程度地減少實(shí)驗(yàn)步驟；
? 高保真：保真度為野生型Taq酶的30倍；
? 極快的延伸速度：10~15 s/kb；
? 超高的耐熱性能：98℃熱處理1 h后聚合酶活性無明顯變化。
產(chǎn)品簡介
1.1×S4 Fidelity PCR Mix（dye-）為1.1×即用型快速PCR預(yù)混液，內(nèi)含S4 Fidelity DNA polymerase、dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系，只需添加引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，可有效擴(kuò)增5 kb以內(nèi)的DNA片段。
該酶具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，擴(kuò)增產(chǎn)物為平末端，可直接用于平末端克隆。
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
1.1×S4 Fidelity PCR Mix(dye-) | 5×1.125 mL |
保存條件
-20℃保存 24 個(gè)月
適用范圍
本產(chǎn)品適用于以試劑盒提取的基因組 DNA、cDNA 和質(zhì)粒 DNA 的 PCR 擴(kuò)增，如基因鑒定、基因克隆等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
本產(chǎn)品為 1.1×PCR 預(yù)混液，無需額外添加 ddH2O。每次反應(yīng)中該產(chǎn)品用量至少應(yīng)占到總反應(yīng)體積的 85%，50 μL 體系至少使用 43 μL PCR Mix，25 μL 至少使用 21 μL PCR Mix；
請使用高質(zhì)量的模板進(jìn)行擴(kuò)增，如試劑盒提取的基因組 DNA。請勿使用 dUTP 或含U嘧啶的引物與模板；
3. PCR Mix 應(yīng)避免反復(fù)凍融，短期內(nèi)多次使用可置于 4℃保存。
常見問題與解決辦法
Q1：擴(kuò)增無產(chǎn)物或產(chǎn)物量少？
A1：
1) 模板降解或模板純度差。電泳檢測模板質(zhì)量，使用高質(zhì)量模板；
2) 模板濃度過低。適當(dāng)增加模板用量；
3) 引物不合適。優(yōu)化引物設(shè)計(jì)；
4) 退火溫度不合適。設(shè)置退火溫度梯度，摸索合適的退火溫度；
5) 循環(huán)數(shù)過少。適當(dāng)增加 5~10 個(gè)循環(huán)；
6) 延伸時(shí)間不足。復(fù)雜模板可適當(dāng)增加延伸速度至 20~30 s/kb。
Q2：擴(kuò)增出現(xiàn)非特異條帶或彌散帶？
A2：
1) 引物特異性差。優(yōu)化引物，避免非特異性條帶以及引物二聚體的擴(kuò)增；
2) 引物濃度過高。降低引物濃度；
3) 模板過量或純度差。減少模板量，使用高質(zhì)量模板；
4) 退火溫度過低。適當(dāng)提高退火溫度或使用 Touchdown PCR 程序；
5) 循環(huán)數(shù)過多。減少循環(huán)數(shù)至 25~30 cycles。
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