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啟動子有哪些特征？

啟動子是一段位于結(jié)構(gòu)基因5’-端上游區(qū)的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準確地結(jié)合，并具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性?；虻奶禺愋赞D(zhuǎn)錄取決于酶與啟動子能否有效地形成二元復(fù)合物。那啟動子有哪些特征？①序列特異性。在啟動子的DNA序列中，通常含有幾個保守的序列框，序列框中堿基的變化會導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄啟動活性的改變。②方向性。啟動子是一種有方向性的順式調(diào)控元件，有單向啟動子和雙向啟動子兩類。③位置特性。啟動子一般位于所啟動轉(zhuǎn)錄基因的上游或基因內(nèi)的前端。處于基因的下游或在基因的上游但離...

PCR體系及各類常見PCR辨析

聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction)簡稱PCR，是一種體外高效擴增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。該技術(shù)的發(fā)明人是KaryMullis，他從1983年開始研究PCR技術(shù)，1985年開始被逐漸采用，成為分子生物學(xué)的一項常規(guī)手段，并得到了廣泛的應(yīng)用，在臨床診斷、生物醫(yī)學(xué)研究和法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的過程，它用加熱的辦法讓需要擴增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對引物讓它們結(jié)合到DNA模板（分別結(jié)合到兩條鏈上...

常用于轉(zhuǎn)染的細胞類型

轉(zhuǎn)染，顧名思義，是指將某種物質(zhì)轉(zhuǎn)移到細胞內(nèi)，是分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的重要技術(shù)。在生物醫(yī)學(xué)研究中，這個“物質(zhì)”通常指的是DNA或RNA。通過轉(zhuǎn)染，我們可以向細胞引入新的基因，或者沉默或敲低細胞內(nèi)的某個基因，從而進行基因功能研究、基因表達調(diào)控，或是進行基因治療等。在實驗過程中，選擇哪種細胞受體也有一定要求，本期我們就來了解一下常用于轉(zhuǎn)染的細胞類型有哪些吧？常用于轉(zhuǎn)染的細胞包括原代細胞、原代細胞衍生物、腫瘤細胞系、幼倉鼠腎細胞（BHK-21）、人胚腎細胞（HEK-293）、人...

PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較

目前，將外源DNA導(dǎo)入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類，即生物方法和物理化學(xué)方法。生物方法主要以病毒作為載體，通過病毒感染的方式將外源DNA導(dǎo)入到細胞中，其中以逆轉(zhuǎn)錄病毒及腺病毒轉(zhuǎn)染系統(tǒng)最為常用。物理化學(xué)方法中常用的有磷酸鈣法、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、顯微注射、電穿孔，以及最近出現(xiàn)的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術(shù)。其中常用的是化學(xué)方法，磷酸鈣、聚乙烯亞胺（PEI）、脂質(zhì)體等化學(xué)試劑較為常用，那么接下來著重探討一下PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理及比較吧。PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用原理使用廣...

怎樣培養(yǎng)造血干細胞呢？

造血干細胞(Hemopoieticstemcells,HSC)有高度的自我更新和多向分化潛能，可以產(chǎn)生所有成熟的血細胞，如紅細胞、白細胞、血小板和淋巴細胞等，并且具有重建整個造血系統(tǒng)的潛能?？筛鶕?jù)其來源將其分類為臍帶血造血干細胞、骨髓造血干細胞、外周血造血干細胞。在眾多研究和臨床應(yīng)用中，造血干細胞被廣泛用于治療急性白血病等血液系統(tǒng)疾病。由于其來源部位獲得不易，造血干細胞十分珍貴，所以其體外擴增既要保持自我更新能力的同時還要阻止其分化。怎樣培養(yǎng)造血干細胞呢？近年來大量實驗表明，...

誘導(dǎo)多能干細胞你知多少？

誘導(dǎo)多能干細胞（inducedpluripotentstemcells，iPSCs）是近年來干細胞研究和臨床治療領(lǐng)域的熱門課題，為再生醫(yī)學(xué)和醫(yī)藥技術(shù)的發(fā)展提供了新的機會，具有里程碑意義。那么關(guān)于誘導(dǎo)多能干細胞你知多少？什么是誘導(dǎo)多能干細胞指由數(shù)個重編程基因?qū)肴梭w細胞逐步誘導(dǎo)獲得，不涉及倫理，且具備胚胎干細胞（ESCs）無限更新增殖和向所有細胞組織器官分化的能力，可以分化出這個人的血細胞，骨細胞，神經(jīng)細胞等，進而培養(yǎng)出這個人的臟器，骨頭，眼角膜等。因此iPSCs又被稱為人造胚...

蛋白Marker的常見問題解答

蛋白Marker即蛋白分子量標準，是一些已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣雖然是其中小小的一環(huán)，然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結(jié)果有著不可忽視的作用。Marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小，只有標準量精確無誤了，實驗結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白Marker還有顯示轉(zhuǎn)膜是否成功、以及蛋白在凝膠上的電泳程度等作用，因此選擇正確的蛋白Marker也是Western...

細胞實驗中為什么要“慢凍快融”呢？

細胞凍存和復(fù)蘇是在細胞研究和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中常見的實驗技術(shù)，用于長期保存和重復(fù)使用細胞。此步驟是細胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細胞實驗?zāi)芊癜凑沼媱澯行У剡M行。要想做好細胞凍存和復(fù)蘇，首先請牢記下面這四個字：慢凍快融！慢凍快融！慢凍快融！重要的事情說三遍！那么細胞實驗中為什么要“慢凍快融”呢？凍存細胞時，細胞內(nèi)外環(huán)境中的水會形成冰晶。如果直接將細胞凍存到-196℃的液氮中，由于凍結(jié)過程中胞外溶液中的水先結(jié)冰，使胞外溶液不斷濃縮，引起細胞電解質(zhì)升高、滲透...